2020版《中国药典》真菌毒素八大热点问题深度解答

中药材从种植、生产、流通的全过程周期较长，控制不当易受真菌毒素危害，再加上真菌毒素的产生与宿主基质特性密切相关，不同类型中药材会产生种类和性质各异的真菌毒素，方位加强中药材中真菌毒素污染水平监控成为《中国药典》2020版的重中之重。

2020版《中国药典》6月正式发布，自该标准发布以来，中药分析检测工作者面临了一系列的挑战。为了宣贯2020年《中国药典》的变化，上海安谱实验科技股份有限公司开展“2020年中国药典标准解读以及中药检测分析技术”专题培训班。针对此次培训，今天小编整理了老师们关注有关真菌毒素检测的八大热点问题。

01 

Q:黄曲mei素检测有哪些注意事项？怎么样才能使测试结果更加准确可靠？

A:在测试黄曲mei素的时候需要注意如下几点，这样能保证测试的准确性。

（1）取样一定要均匀，对于性质特殊的供试品，可适当调整取样量，像地龙比较粘稠的可以适当调整取样量，不过一般应不低于5g；

（2）正确的测试免疫亲和柱，可测柱回收率，考察免疫亲和柱的性能；

（3）采用第yi法液相色谱法测定结果超出限度时，应采用第二法液相色谱串联质谱法进行确认；

（4）进行真菌毒素检测时，实验室应有相应的安全防护措施，不得污染环境；黄曲霉du素的毒性很强，需要采取必要的安全措施。建议设用单独的实验室和实验器材，不与别的实验一起混用；

（5）残留有黄曲霉du素的废液或者废渣的玻璃器皿，应置于储存容器（装有10%次氯酸奶溶液）内，浸泡24h以上，再用清水将玻璃器皿清洗干净。

02 

Q:真菌毒素实验的过程中使用的对照品有什么要求？

A:（1）对照物质应能够溯源量值，shou选使用法定标准物质；

（2）很多品种为剧du品，使用时应加强安全防护；

（3）一般情况下不推荐使用固体纯品，已知浓度的标准物质溶液（或混合溶液）在痕量分析中使用更为方便，也更为广泛；

（4）针对很多剧毒成分，如黄曲霉du素，使用标准物质溶液也能够有效减少对检验人员的安全风险。通常，首先配置成1-100ug/ml的浓溶液，作为储备液使用。储备液可保存在惰性，密封，避光，低温环境下。储备液的浓度，溶剂，配制日期应详细记录，并在原始记录中明确显示，以便于溯源。储备液的有效期应根据稳定性测试数据确定。

03

Q:中药中痕量残留量检测分析中空白实验怎么防止污染与干扰？

A:防止污染与干扰是痕量分析质量控制的重要内容：

（1）避免交叉污染：样品储存需要采用通过密封或者分开放置等方式防止样品之间，防止样品之间，样品与潜在污染源之间的互相污染；实验室器皿建议，检测所使用的器皿应有针对性的仔细清洗，尤其需要避免标准物质，高浓度阳性样品与普通样品间的交叉污染。实验试剂应选择适宜纯度，并通过使用瓶口分液器等方式减少试剂瓶多次开启造成的试剂被污染。

（2）日常质控要求：每次检测均应随行空白实验，即不取样，*按照供试品溶液制备程序操作并测定，以便反应试剂，器皿，环境对测定的干扰情况。当空白实验干扰峰峰面积（响应值）不高于较准曲线浓度低点峰面积（响应值）的1/2时，可认为无干扰。在试验操作过程中，通常按照空白实验，样品测定，回收试验的顺序操作，严格避免交叉污染。

04

Q:使用免疫亲和柱的注意事项有哪些？样品的PH在什么范围时柱效是hao的？

A:在过免疫亲和柱之前如果溶液不够澄清的话，需要用离心或者玻璃滤纸过滤的方法使溶液澄清后再过免疫亲和柱。建议使用前仔细阅读使用的注意事项比如可冷藏不能冷冻，注意使用亲和柱（shi合的PH值6-8）的时候先测一下样品的PH值，是中性的话柱效果是hao的。在进行回收率考察的时候先进行柱回收率的考察，把适当的黄曲mei素的混合标准溶液先通过免疫亲和柱后进行测试，考察一下免疫亲和柱的性能，再考察整体的回收率。

05

Q:检测限的确定需要做什么工作?准确度和精密度吗？检测限的概念是应该是定量限吗？

A:检测限（报告限）是指残留量被作为数值报告的低浓度。检测限一般等于或略高于低较准浓度，具有可接受的准确度和精密度，是高于实际方法定量限的一个固定数值。

当MPL（大残留量）≥0.1mg/kg时，检测限应<1/10MRL；当MPL<0.1mg/kg时，检测限应≤1/3MRL。由于检测限的设定，检验人员不必每一次进行样品分析时都严格进行LOQ测定，可以节省很多人力物力；同一体系内部的各实验室间针对同一方法也可以设定一致的检测限，这样一来出具的报告具有了可比性，也便于统计分析，发布结果。

06

Q:黄曲mei毒素方法验证中检出限怎么做？

A:关于检出限的概念容易混淆，检出限有仪器检出限和方法检出限两种。仪器检出限仅仅反应的是检测系统的响应，通常把标准品稀释用3倍的信噪比的进样量来表示。方法的检出限应该是在空白基质中定量的加入对照品，后按照供试品的提取方法进行提取，然后进行检测分析，获得1/10的信噪比。对应的加入的对照品的浓度就是方法的检出限。在20版在做黄曲霉mei毒素的测定实验时，建议做仪器的检出限，然后再折算成样品的检出限。

07

Q:不同基质的中药材中真菌毒素的检测有什么不同？会因为基质不同而出现结果的差异吗？

A:基质效应的影响因子是根据基质效应因子进行判断的，基质效应是指在对分析物的浓度或质量测定过程中，来自样品中其它化合物的一种或者几种综合的影响。基质因子是指空白样品溶液加标测定值与纯溶剂配制同样浓度标准品溶液测定值的比值。机制效应的评定采用的机制因子进行评定的。不同品种，不同成分，基质影响不同，有普遍偏低现象。如果机制效应因子在85%-115%之间说明机制效应在不同的方法不存在显著差异，不同的品种不同的材质机制效应是不同的。按照通则去做，不同基质在液质上会有基质干扰，这个干扰的大小会因为基质不同而不同，实验过程中需要针对不同基质做一些方法上的改进。例如地龙按药典没办法提取，需要进行一些实验的优化和调整的。

08

Q:怎么做一条好的校准曲线？

A:校正曲线是用于描述待测物质的浓度或量与相应的测量仪器的响应量或其他指示量之间的定量关系的曲线。校准曲线的制定需要满足以下条件：线性范围在检测器jia响应范围内；一般要求，低校准浓度（CL）所对应的样品中待测物浓度应≤1/10MRL（当MRL≥0.1mg/kg时），或≤1/3MRL（MRL<0.1mg/kg时）。大残留*（MRL）所对应的供试品速溶浓度应在校准曲线的中间或偏上浓度位置；gao校准浓度可根据样品中待测物的可能残留量及仪器的线性检测能力设置为MRL的2-10倍；线性范围一般无需强制通过原点，校准曲线相关系数一般不低于0.990；当线性范围超过1个数量级时，可使用分段校准或采用加权校准的方式，测量误差小于简单的线性校准；完成样品测定或每完成一定批次样品分析后，应再次分析校准曲线中的代表性浓度标准溶液（如MRL对应的浓度点），响应值和校准曲线偏差应在±15%以内。