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食品中乳铁蛋白测定的整体解决方案——GB 5009.299-2024

更新时间:2024-06-07      点击次数:134
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乳铁蛋白是近几年开发研究速度最快的营养添加剂之一,不仅具有广谱抗菌,抗病毒感染作用,还能调节体内铁平衡、调解骨髓细胞的生成等。乳铁蛋白在国内外食品加工中的应用日益广泛,故有关乳铁蛋白的安全生产和使用是需要重点关注的问题。

安谱实验根据《GB 5009.299-2024 食品安全国家标准 食品中乳铁蛋白的测定》,使用 Poly-Sery 肝素亲和柱(SBEQ-CC65001)对牛奶和奶粉进行样品净化结合高效液相色谱(Athena C4 液相色谱柱,LAEQ-461579)测定乳铁蛋白。实验结果表明 PolySery 肝素亲和柱回收率高,性能稳定,在保证高回收率的同时流速适中,可以显著节约工时和操作时间。




产品特点

1、性能优异:柱容量和回收率满足标准要求,性能稳定,平行性优异;

2、流速适中:CNW 小柱流速与市面上现有品牌小柱相比,快 1~1.5 倍,在保证回收率效果的同时,能够节约工时和操作时间,节省人力物力;

3、适用范围广:适用于牛奶、奶粉类等基质,同时适用于GB 5009.299-2024与NY-T 4439-2023标准方法,能够满足不同检测的需要。




一、样品前处理

溶液配置:

u磷酸盐缓冲液Ⅰ(洗脱液):

将磷酸盐缓冲包Ⅰ450 mL 纯水溶解,用10 M 氢氧化钠溶液调节pH至 7.5±0.2,定容至 500 mL,转移至洁净密封的试剂瓶中。

磷酸盐缓冲液Ⅱ(提取液):

将磷酸盐缓冲包Ⅱ用 900mL 纯水溶解,用磷酸溶液调节 pH 至 7.5 ± 0.2,定容至1L,转移至洁净密封的试剂瓶中。


样品提取:

牛奶:

称取 5g 试样于烧杯中,加标后,加入适量磷酸盐缓冲液Ⅱ提取,分次将样品转移至 25 mL 容量瓶,用磷酸盐缓冲液Ⅱ 定容至刻度,充分混匀后转入离心管 5000 r/min 离心 15 min,取样液待净化。

婴儿配方奶粉:

称取 5g 试样于烧杯中,加标后,加入温热 ( 温度不超过 50 ℃ ) 的磷酸盐缓冲液 Ⅱ,搅 拌使样品溶解,冷却至室温,分次将样品转移至 50 mL 离心管中并用磷酸盐缓冲液 Ⅱ 定容至刻度,充分混匀后转入离心管中,取 40 mL 溶液在室温条件下 5000 r/min 离心 15 min,取样液待净化。

柱容量验收:

上样加标 2 mg。


SPE 小柱操作:

肝素亲和柱(SBEQ-CC65001,6 mL/30 pcs)

活化:5 mL 磷酸盐缓冲液Ⅱ;

上样:10 mL 上清液(1 d/2 s);

淋洗:10 mL 磷酸盐缓冲液Ⅱ,排干;

洗脱:4.5 mL 磷酸盐缓冲液Ⅰ,排干,收集全部洗脱液。磷酸盐缓冲液Ⅰ定容至 5 mL 混合,过 0.22 μm 滤器后,进样,待HPLC/UV 检测。


注意事项:

①上样要注意控制流速,流速过快可能造成10%-15% 左右损失; 

② 进样前的针式滤器,推荐采用亲水PVDF滤器、亲水PTFE滤器及水相聚醚砜针式滤器进行过滤,不推荐尼龙针式滤器,可能造成40%-60%的损失。




二、仪器条件

液相色谱:ACQUITY UPLC超高效液相色谱仪

a) 色谱柱:Athena C4液相色谱柱(LAEQ-461579,4.6*150 mm, 5 μm, 300 A, 含柱效液);

b) 流速:1.0 mL/min

c) 流动相:0.1%三_氟_乙_酸,乙腈梯度洗脱,详情见下表。

表 1-1 梯度洗脱表

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三、实验谱图

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图 1-1 100 ppb 标准溶液谱图

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图 1-2 牛奶样品加标谱图

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图 1-3 婴儿配方奶粉样品加标谱图




四、实验数据


表 1-2 水样加标回收率数据


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五、实验结论

参照GB 5009.299-2024使用Poly-Sery 肝素亲和柱进行柱容量验证及牛奶基质、婴儿配方奶粉基质乳铁蛋白加标实验,可以看出,肝素亲和柱的柱容量回收率超过 95%,且婴配奶粉基质回收率高于其他国产品牌, RSD 值小于 5%,平行性优异,柱容量满足国标要求。说明 CNW 小柱具有优异的性能。




六、产品推荐

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