食品中乳铁蛋白测定的整体解决方案——GB 5009.299-2024

产品特点

溶液配置：

u磷酸盐缓冲液Ⅰ（洗脱液）：

将磷酸盐缓冲包Ⅰ450 mL 纯水溶解，用10 M 氢氧化钠溶液调节pH至 7.5±0.2，定容至 500 mL，转移至洁净密封的试剂瓶中。

磷酸盐缓冲液Ⅱ（提取液）：

将磷酸盐缓冲包Ⅱ用 900mL 纯水溶解，用磷酸溶液调节 pH 至 7.5 ± 0.2，定容至1L，转移至洁净密封的试剂瓶中。

样品提取：

牛奶：

称取 5g 试样于烧杯中，加标后，加入适量磷酸盐缓冲液Ⅱ提取，分次将样品转移至 25 mL 容量瓶，用磷酸盐缓冲液Ⅱ 定容至刻度，充分混匀后转入离心管 5000 r/min 离心 15 min，取样液待净化。

婴儿配方奶粉：

称取 5g 试样于烧杯中，加标后，加入温热 ( 温度不超过 50 ℃ ) 的磷酸盐缓冲液 Ⅱ，搅 拌使样品溶解，冷却至室温，分次将样品转移至 50 mL 离心管中并用磷酸盐缓冲液 Ⅱ 定容至刻度，充分混匀后转入离心管中，取 40 mL 溶液在室温条件下 5000 r/min 离心 15 min，取样液待净化。

柱容量验收：

上样加标 2 mg。

SPE 小柱操作：

肝素亲和柱（SBEQ-CC65001，6 mL/30 pcs）

活化：5 mL 磷酸盐缓冲液Ⅱ；

上样：10 mL 上清液（1 d/2 s）；

淋洗：10 mL 磷酸盐缓冲液Ⅱ，排干；

洗脱：4.5 mL 磷酸盐缓冲液Ⅰ，排干，收集全部洗脱液。磷酸盐缓冲液Ⅰ定容至 5 mL 混合，过 0.22 μm 滤器后，进样，待HPLC/UV 检测。

注意事项：

①上样要注意控制流速，流速过快可能造成10%-15% 左右损失； 

② 进样前的针式滤器，推荐采用亲水PVDF滤器、亲水PTFE滤器及水相聚醚砜针式滤器进行过滤，不推荐尼龙针式滤器，可能造成40%-60%的损失。

液相色谱：ACQUITY UPLC超高效液相色谱仪

a) 色谱柱：Athena C4液相色谱柱（LAEQ-461579，4.6*150 mm, 5 μm, 300 A, 含柱效液）；

b) 流速：1.0 mL/min

c) 流动相：0.1%三_氟_乙_酸，乙腈梯度洗脱，详情见下表。

表 1-1 梯度洗脱表

参照GB 5009.299-2024使用Poly-Sery 肝素亲和柱进行柱容量验证及牛奶基质、婴儿配方奶粉基质乳铁蛋白加标实验，可以看出，肝素亲和柱的柱容量回收率超过 95%，且婴配奶粉基质回收率高于其他国产品牌， RSD 值小于 5%，平行性优异，柱容量满足国标要求。说明 CNW 小柱具有优异的性能。