2025版药典通则0512高效液相色谱法中参数调整范围解析（含实例）

2025版《中华人民共和国药典》（以下简称《中国药典》）正式颁布并于2025年10月1日开始实行，对于25版药典中高效液相色谱方法参数调整允许范围与20版有更详细的要求，为了更好的执行法规，下面我们对2025版《中国药典》色谱参数允许调整表中每一项进行分析解读，并进行了举例说明，便于我们的理解执行。

🔸 原文：

不得改变填充剂的理化性质如填充材质，表面修饰及键合相需保持一致。

🔸 说明：

填充材质包含基质，比如硅胶基质，聚合物基质。

🔸 原文：

改变色谱柱填充剂粒径和柱长后，L/dp值应保持不变或在原规定值的-25%~+50%范围内。

🔸 说明：

例如：原色谱柱规格：4.6×250，5 μm。

🔸 要求：

分别替换为3 μm和5 μm粒径，计算其合规的柱长范围。

🔸 计算如下：

原色谱柱的L/dp值为：250/5=50

则可更换成L/dp为：50×0.75~50×1.5=37.5~75

🔸 原文：

在满足等度或梯度洗脱要求[如为等度洗脱，当理论板数(n)在原色谱柱的-25%~+50%范围内;如为梯度洗脱，当所有色谱峰(t_R/W_h/2)²值在原色谱柱的-25%~+50%范围内]时可以调整，且可使用L和dp的其他组合。前提是应满足系统适用性要求，且已知成分的选择性和出峰顺序不变。

🔸 说明：

例如：原色谱柱规格：4.6×250mm，5μm等度条件和梯度条件下理论塔板数是20000。

🔸 要求：

分别替换为2.7μm粒径，计算其在等度和梯度下合规的柱长范围。

🔸 原文：

在填料粒径和/或柱长没有变化的情况下，可以调整柱内径。为避免柱内径减小可能引起的柱外谱带展宽，应减小仪器连接死体积、进样量或检测池的体积，适当增加采集速率。

🔸 说明：

建议柱内径≤2.1mm关注设备死体积，包含样品流经的全部管路，内径使用≤0.12mm和长度尽可能的短，检测器使用半微量流通池，工作站采集频率根据峰宽进行调整，如果出现谱图出峰早的峰形异常（拖尾，前沿，峰分叉等）出峰晚的峰形越来越对称，可以判断为是柱外死体积太大导致，进行设备的优化。

🔸 原文：

等度洗脱时，在柱尺寸未改变时，允许流速调整士50%。当柱内径和粒径改变时，按下式计算并调整流速：

柱尺寸的变化作上述调整后，允许流速额外变化±50%，梯度洗脱时，当柱内径和粒径改变时，按下式计算并调整流速。

🔸 说明：

该参数调整与粒径不相关，如果条件中没有规定流速，可以根据项目情况选择合适的流速，如：内径4.6mm柱使用1ml/min；4mm柱使用0.8ml/min，如果标准中规定了流速则流速的调整需按以下要求来调：原色谱柱使用4.6×250mm ,5μm 流速是1ml/min，分别计算

1、柱子不改变时的流速范围；

2、等度条件下色谱柱更换成3×250mm ,3μm时的流速在多少；

3、梯度条件下色谱柱更换成3×250mm,3μm时的流速在多少。

根据公式分别带入新色谱柱的内径和粒径得如下：

🔸 原文：

即便色谱柱尺寸没有调整，也可调整进样体积以满足系统适用性的要求，上述体积调整公式可能不适用于表面多孔(SPP)柱替代全多孔(TPP)柱。

🔸 说明：

该参数调整与粒径不相关，色谱柱规格未调整时也可以调整进样体积，但没有给出范围，前提是满足系统适用性要求，同时不能因为进样体积改变而导致低响应物质未检出。

例如：原色谱柱使用4.6×250mm ,5μm 进样体积20μl，更换成色谱柱3.0×150mm ,3μm时进样体积根据公式计算是：5.1μl，方便操作选择5μl。

🔸 原文：

占比小的流动相组分比例可在相对值±30%进行调整，但任何组分比例的变化不能超过绝对值±10%。占比小的流动相组分是指小于或等于(100/n)%比例的组分，n为流动相中含有的组分数。

🔸 说明：

需要同时满足两个条件，小比例的相对值±30%及任何组分比例变化绝对值的±10%。

例如：甲醇-水 = 70:30的调整范围计算

已知条件：流动相组成是甲醇 : 水 = 70 : 30

组分数 n=2  100/n=100/2=50% 

占比小的组分：水（30%）

最终允许范围：

甲醇 : 水 = 61:39 ～ 79:21

🔸 原文：

满足以下条件的情况下，可对流动相的比例和梯度洗脱程序进行适当调整:

(1)满足系统适用性要求;

(2)出峰顺序不变，分离度和灵敏度满足要求;

(3)流动相的组成和梯度洗脱程序应使第一个峰被充分保留，最后一个峰被wan全洗脱。

各梯度段梯度时间的调整详见后文。

🔸 说明：

梯度洗脱条件的调整可分步进行:

(1)根据L/dp调整柱长和粒径;

(2)根据粒径大小和柱内径的变化调整流速;

(3)根据柱长、柱内径和流速的变化，调整每个梯度段的梯度时间。药典中描述相对“模糊"需要在实际分析中谨慎对待并根据具体情况做适合调整。

🔸 原文：

等度洗脱:除另有规定外，在原规定温度的±10 ℃范围内调整

梯度洗脱:除另有规定外，在原规定温度的±5 ℃范围内调整

🔸 说明：

如果标准中未规定柱温，可以根据我们的操作习惯硅胶基质色谱柱设定30℃，聚合物基质色谱柱根据应用环境会稍高，氨基柱测定糖类设定40-45℃。

若标准中规定柱温为30 ℃，那么等度洗脱可变化范围为20-40 ℃，梯度洗脱可变化范围为25-35 ℃。

🔸 原文：

原规定值±10%范围内调整。

🔸 说明：

如果方法中的盐浓度为0.05 mol/L，调整范围是0.045 mol/L-0.055 mol/L，调整时需关注更高浓度时与有机相是否有溶解性挑战。

🔸 原文：

除另有规定外，流动相中水相pH值在原规定值±0.2 pH范围内调整。

🔸 说明：

如果方法中规定了pH调整范围则按照方法执行，反之则使用该规定，比如：方法中的pH值为2.5，则可以在2.3-2.7的范围内进行。

🔸 原文：

不允许改变。

🔸 说明：

检测器类型和检测波长均不能做改变。