CNWSIL SCX柱快速检测原料乳中的三聚氰胺

方法来源： GB/T 22400-2008 原料乳中三聚氰胺快速检测液相色谱法

上海安谱科学仪器有限公司根据国标方法《GB/T 22400-2008 原料乳中三聚氰胺快速检测液相色谱法》对乳中三聚氰胺的快速检测方法进行了实验，采用CNWSIL SCX强阳离子交换色谱柱对三聚氰胺进行检测，保留时间约为9.7分钟左右，能够很好的与乳中的杂质分离，柱效好，非常适用于原料乳中的三聚氰胺（melamine）快速检测。

谱图(见产品图片）

色谱柱：CNWSIL SCX强阳离子交换色谱柱（250×4.6mm,5um) (货号：LAEQ-4525004605)
流动相：磷酸盐缓冲溶液－乙腈（70＋30，体积比）
流速：1.5ml/min
波长：240nm
进样量：20ul

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附：
GB/T 22400—2008 原料乳中三聚氰胺快速检测液相色谱法
Rapid determination of melamine in raw milk High performance liquid chromatography method


主要实验步骤和注意事项：
4 试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯或以上规格，水为GB/T 6682规定的一级水。
4.1 乙腈（CH3CN）：色谱纯。
4.2 磷酸（H3PO4）。
4.3 磷酸二氢钾（KH2PO4）。
4.4 三聚氰胺标准物质（C3H6N6）：纯度大于或等于99%。
4.5 三聚氰胺标准贮备溶液：1.00×103 mg/L。
称取100 mg 三聚氰胺标准物质（准确至0.1 mg），用水*溶解后，100 mL 容量瓶中定容至刻度，
混匀，4℃条件下避光保存，有效期为1 个月。
4.6 标准工作溶液：使用时配制。
4.6.1 标准溶液A：2.00 ×102 mg/L。
准确移取20.0 mL 三聚氰胺标准贮备溶液（4.5），置于100 mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。
4.6.2 标准溶液B：0.50 mg/L。
准确移取0.25 mL 标准溶液A（4.6.1），置于100 mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。
4.6.3 按表1 分别移取不同体积的标准溶液A（4.6.1）于容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。按表2
分别移取不同体积的标准溶液B（4.6.2）于容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。
4.7 磷酸盐缓冲液：0.05 mol/L。
称取6.8 g磷酸二氢钾（4.3）（ 准确至0.01 g），加水800 mL*溶解后，用磷酸（4.2）调节pH至3.0，
用水稀释至1 L，用滤膜（4.9）过滤后备用。
4.8 一次性注射器：2 mL。
4.9 滤膜：水相，0.45 μm。
4.10 针式过滤器：有机相，0.45 μm。
4.11 具塞刻度试管：50 mL。


（表略。）


5 仪器
5.1 液相色谱仪：配有紫外检测器/二极管阵列检测器。
5.2 分析天平：感量0.0001 g 和0.01 g。
5.3 pH 计：测量精度±0.02。
5.4 溶剂过滤器

6 测定步骤
6.1 试样的制备
称取混合均匀的15 g原料乳样品（准确至0.01 g），置于50 mL具塞刻度试管（4.11）中，加入30 mL
乙腈（4.1），剧烈振荡6 min，加水定容至满刻度，充分混匀后静置3 min，用一次性注射器（4.8）吸
取上清液用针式过滤器（4.10）过滤后，作为高效液相色谱分析用试样。
6.2 高效液相色谱测定
6.2.1 色谱条件
a) 色谱柱：强阳离子交换色谱柱，SCX，250 mm × 4.6 mm（i.d.），5 μm，或性能相当者。
注： 宜在色谱柱前加保护柱（或预柱），以延长色谱柱使用寿命。
b) 流动相：磷酸盐缓冲溶液（4.7）- 乙腈（70+30，体积比），混匀。
c) 流速：1.5 mL/min。
d) 柱温：室温。
e) 检测波长：240 nm。
f) 进样量：20 μL。

6.2.2 液相色谱分析测定
6.2.2.1 仪器的准备
开机，用流动相平衡色谱柱，待基线稳定后开始进样。
6.2.2.2 定性分析
标准溶液A体积（mL） 0.10 0.25 1.00 1.25 5.00 12.5
定容体积（mL） 100 100 100 50.0 50.0 50.0
标准工作溶液浓度（mg/L） 0.20 0.50 2.00 5.00 20.0 50.0
标准溶液B体积（mL） 1.00 2.00 4.00 20.0 40.0
定容体积（mL） 100 100 100 100 100
标准工作溶液浓度（mg/L） 0.005 0.01 0.02 0.10 0.20
依据保留时间*性进行定性识别的方法。根据三聚氰胺标准物质的保留时间，确定样品中三聚氰
胺的色谱峰（参见附录A）。必要时应采用其他方法进一步定性确证。
6.2.2.3 定量分析
校准方法为外标法。
6.2.2.3.1 校准曲线制作
根据检测需要，使用标准工作溶液（4.6.3）分别进样，以标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积为
纵坐标，绘制校准曲线。
6.2.2.3.2 试样测定
使用试样（6.1）分别进样，获得目标峰面积。根据校准曲线计算被测试样中三聚氰胺的含量（mg/kg）。
试样中待测三聚氰胺的响应值均应在方法线性范围内。
注： 当试样中三聚氰胺的响应值超出方法的线性范围的上*，可减少称样量再进行提取与测定。


10 注意事项
a) 如果保留时间或柱压发生明显的变化，应检测离子交换色谱柱的柱效以保证检测结果的可靠性；
b) 使用不同的离子交换色谱柱，其保留时间有较大的差异，应对色谱条件进行优化；
c) 强阳离子交换色谱的流动相为酸性体系，每天结束实验时应以中性流动相冲洗仪器系统进行维护保养。